开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 拟研究的问题
microrna-375（mir-375）的异常表达已被证实与癌变有关。 MicroRNAs（miRNAs）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小长约20~25个核苷酸，在乳腺癌的发展和进展中起着关键作用。 然而，MIR-375在乳腺癌生长和转移中的确切作用和潜在的分子机制尚不清楚。基于肿瘤干细胞是肿瘤发生发展的根源，本课题旨在初步探索miR-375调控乳腺癌CSCs样特性的作用及其机制。
二．实验主要内容
本实验的研究包括以下几项内容：
1.确证miR-375是否可调控乳腺癌细胞干性标志分子的表达；
2. 确证miR-375是否可调控乳腺癌细胞成球能力；
3.确证miR-375是否可正向调控乳腺癌细胞中CD44 干性细胞群比例；
4.初步探索miR-375调控乳腺癌细胞干性的机制。
- 实验方法
1,Western blot：检测目的基因蛋白表达水平
配制10%分离胶，室温静置45 min。待胶凝结后，倒去上层去离子水。配置5%浓缩胶，室温静置30 min。待浓缩胶凝结后，将制胶板放入电泳槽内，在内液面加入电泳缓冲液致漫出，然后拔下梳齿，在上样孔中加入5 mu;l蛋白marker或10 mu;l样品（30 mu;g）。使用60 V电压进行电泳40 min，然后100 V继续电泳2 h左右至溴酚蓝即将泳离凝胶为止。立即进行湿法转膜，200 mA恒流转膜。根据所检测蛋白分子量大小按照每kD每分钟的时间进行转膜。转膜完毕后用5%脱脂牛奶的TBST封闭液中室温封闭1h。使用5% BSA配制一抗，1: 1000稀释，4℃静置过夜。次日吸弃一抗，使用TBST在脱色摇床上洗涤3次，每次15 min。加入用TBST按1: 5000配制的二抗，在脱色摇床上室温孵育1h，再使用TBST在脱色摇床上洗涤3次，每次10 min。配制ECL发光液，以A液: B液1: 1的比例配制。将洗好的膜放置在化学发光检测仪中，滴加ECL发光液在膜上，选择合适的时间进行曝光摄像。
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