课题名称:
中药水蛭中FXa抑制剂的分离纯化
研究意义:
水蛭俗称蚂蟥,属环节动物门蛭纲类。水蛭干制品炮制后中医入药,具有治疗中风、高血压、清瘀、闭经、跌打损伤等功效。目前已知水蛭中的抗凝成分主要为一些小分子肽类,研究最为透彻的是从水蛭唾液腺中提取出的水蛭素,是由6566个氨基酸组成的小分子多肽,水蛭素对凝血酶有很强的的抑制作用。但是水蛭中所含的抗凝物质不仅仅只存在于水蛭的新鲜唾液中,应该是体内本身所含有的,在炮制和长期储存后才可以保持良好的活性,使得水蛭干制品能发挥其药理作用。本研究对中药水蛭中FXa抑制剂进行分离纯化来研究水蛭干制品入药的作用机制。
FXa是凝血因子(是参与血液凝固过程的各种蛋白质组分)中第十个因子,STUART(-PROWER)-F,自体凝血酶原C。FXa的作用环节位于内源性和外源性凝血途径的交汇点,是一种丝氨酸蛋白酶,可以裂解凝血酶原生成凝血酶的活性。通过抑制FXa可抑制凝血酶的生成从而抑制凝血,由于不抑制已经生成的凝血酶的活性,所以极少会发生又出血引起的副反应。FXa抑制剂在发挥药效时候的浓度要比凝血酶抑制剂的浓度低很多,因此FXa其效果比凝血酶抑制剂的效果会更好,副作用也会更小。因此研究中药水蛭中FXa具有重要的意义。
采用的研究方法:
一、 粗提取
取100g炮制好的水蛭,洗净表面残留的滑石粉,晾干,用多功能粉碎机粉碎。将粉碎好的水蛭粉末转移至1L的烧杯中,加入5倍体积的石油醚脱脂两次每次2小时期间搅拌不少于20次或连续搅拌,倾倒弃去石油醚,再加入8倍体积的去离子水于(温度60,时间24h)提取两次,合并两次的提取液上清,弃去残渣。再用10KD的超滤膜过滤,弃去截留物质,合并下层清液,冻干称重。
二、 用离子交换的方法分离纯化
(一)阴离子交换层
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