探究CPUL1的抗肿瘤活性
摘要:目的:CPU L1的前体是来源于海洋极端微生物的代谢产物，体外药效学研究表明其拥有一定的抗肿瘤活性。本研究的目的是在体外研究的基础上对CPU L1的体内抗肿瘤活性进行进一步研究。方法：复苏、培养HepG2人源肝癌细胞后，按一定剂量皮下注入裸鼠右前肢腋下，构建人源肝癌细胞裸鼠肿瘤模型。 将建模成功的裸鼠随机分成6组，每组不少于8只，分别尾静脉给予CPU L1高中低剂量，同时设立阳性药物组、空白对照组和溶剂对照组。设定时间点测定受试裸鼠的体重及肿瘤体积变化情况。在末次给药24h测定受试裸鼠的体重及肿瘤体积后，收集其血液；断颈处死实验裸鼠，剥取肿瘤，称重后-80℃保存备用。结果：根据受试鼠的体重与肿瘤体积随时间的变化情况，分析CPU L1在裸鼠体内的抗瘤初步效果。
关键词：抗肿瘤，HepG2，细胞培养
前言
人类发现恶性肿瘤已有3000年以上历史。恶性肿瘤细胞周期失控，可持续分裂与增殖，具有一定的迁移性，且丧失接触抑制。WTO调查数据表明，全球约有恶性肿瘤患者约22,000万，当代社会因病死亡中，肿瘤已成为致死的第一杀手，且发病率持续升高。预计到2020年，肿瘤发病率将较现在增加50%。在国内，恶性肿瘤死亡率70年代为83.65/10万，90年代为108.26/10万，上升了29.42%[1]，也呈现上升趋势。因此，对肿瘤的防治与研究工作具有十分重要的意义。
目前恶性肿瘤的治疗方法仍是以手术、化疗、放疗为主的综合治疗。许多抗肿瘤药物均是通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化或凋亡发挥抗肿瘤作用，临床常用化疗药物多是通过细胞毒作用杀伤肿瘤细胞，具有较大的副作用，患者难以承受；另一方面，某些肿瘤细胞因对化疗药物或放射线不敏感而导致治疗效果不理想。
近几年来，肿瘤化疗取得了相当的进步，肿瘤患者生存时间明显延长，特别是对白血病、恶性淋巴瘤等的治疗有了突破，但对危害人类生命健康最严重的、占恶性肿瘤90%以上的实体瘤治疗未达到满意效果[2]。因此需开发毒副作用小、治疗效果好的新型抗肿瘤药物，以降低肿瘤患者死亡率，提高其生存质量。海洋资源丰富，生态环境特异，导致海洋微生物在物种、基因组成和生态功能上与陆生生物极为不同的多样性[3-4]。在此基础上，自海洋极限环境分离的微生物，其代谢产物能提供多种多样的活性物质，代表着正在探索而尚未开发的新的微生物领域，是生物活性物质的丰富来源，也是新药的潜在来源，海洋极端微生物的进一步研究既有科学意义，又有实用前景。CPU L1的前体是来源于海洋极端微生物，明确拥有一定抗肿瘤活性的新化合物。本文拟对CPU L1的抗肿瘤活性在HepG2肿瘤裸鼠模型上进行进一步研究，以探索其对实体瘤的效果。
第一章 HepG2人源肝癌细胞培养
1.1原理
HepG2细胞来源于一个15岁白人的肝癌组织，分泌多种血浆蛋白，广泛应用于遗传毒理学试验[5]、外源性生物性异物的细胞毒性[6-7]、乙型肝炎病毒感染机制、病毒培养等方面的研究。其培养操作繁琐，牵涉面广，影响因素众多。培养成功与否，直接关系到后续实验的成败。细胞采取40℃先溶解后37℃水浴恒温的复苏方法，含12％胎牛血清DMEM培养基培养，采用先PBs洗涤后胰酶消化的方法于汇合度95％～100％时传代的方法进行培养，能获得最佳培养效果[8-9]。
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