开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、拟研究或解决的问题:
免疫分析是以抗原与抗体之间特异性识别和可逆性结合反应为基础的痕量分析方法,已在临床分析和生物分析中得到广泛应用。免疫分析不仅适用于大分子化合物(如蛋白质、核酸、细菌)的检测,也适用于小分子化合物(如激素、药物)的测定。由于免疫分析具有特异性强、灵敏度高、简单、快速、费用低和适用于现场大批量样品筛选等优点,在环境和食品安全等分析领域中的应用备受关注【1】。而制备抗体和建立免疫分析方法的前提,就是制备具有良好免疫原性的人工抗原。
半抗原没有免疫原性,直接注射入动物体内不能诱导抗体的产生,只有偶联到载体蛋白上,才能诱导机体产生免疫应答反应。所以在制备抗体前首先要合成药物半抗原-载体蛋白偶联物,即合成人工抗原。这一过程包括对半抗原的设计、修饰、载体的选择、半抗原与载体的偶联(偶联率的测定)、人工抗原的纯化与鉴定等方面【2】。能否合成稳定、具有良好免疫原性的药物载体结合物是最关键的步骤。
二、研究手段:
1.紫堇达明琥珀酰酯衍生物的合成【3】
紫堇达明与丁二酸酐于三颈圆底烧瓶中,加入吡啶,油浴避光反应并搅拌9小时。反应产物用氯仿溶解,以蒸馏水洗3次。收集合并氯仿层,减压浓缩,得到紫堇达明琥珀酰酯衍生物。产物浓缩后用Sephadex LH-20柱分离,以氯仿:甲醇(1:1)为流动相进行柱层析,TLC实时监测。
2. 紫堇达明琥珀酰酯衍生物与蛋白偶联
CDL-HS、NHS、二环己基碳二亚胺(DCC)溶于DMF中,置于磁力搅拌器上室温搅拌反应4h后,将牛血清蛋白(BSA)溶于PBS中,磁力搅拌器搅拌下逐滴加入BSA溶液,4C搅拌反应过夜。反应完毕后将反应产物装入透析袋中,双蒸水透析72h,冷冻干燥得白色粉末,-20C保存。
将牛血清蛋白(BSA)换成卵清蛋白(OVA),同样方法操作。
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