开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字)
1.拟研究的问题
神经胶质瘤作为目前在临床上的高发性脑部肿瘤，死亡率高，预后差，复发率高的特点，现有证据证明，胶质瘤复发与胶质瘤对替莫唑胺( TMZ) 的耐药有密切的关系，但是目前对于胶质瘤的TMZ耐药的原因众说纷纭，为了在体内研究胶质瘤TMZ耐药的可能机制，我们在前期构建TMZ胶质瘤耐药细胞株的基础上，拟建立U251耐药腋下移植瘤，对这一移植瘤的生物学行为和可能的耐药机制进行研究。
2.研究手段
（1）实验材料：
U251细胞系、U251神经胶质瘤耐TMZ细胞系、雌雄各半的5周大的裸鼠、替莫唑胺等。
（2）实验方法：
1.皮下移植瘤模型构建：培养U25耐TMZ细胞系，按照1.0106每只，U251细胞按照1.0106每只的细胞浓度接种在裸鼠的腋下，待肿瘤长出后，计为P1代，收集P1代肿瘤，剪碎，接种与裸鼠的腋下，长出的肿瘤即为P2代，以此类推获取P3代瘤块。将从P3代瘤组织剪碎，使用穿刺针，腋下种植于5周大左右的雌性和雄性裸鼠中。当肿瘤的体积达到当肿瘤的体积达到50mm3时，耐药和母本肿瘤各分为2组，分别选取一组给予TMZ（25mg/kg），连续给予3周并记录肿瘤瘤径。于3周后处死小鼠，收集肿瘤，制备组织切片、蛋白裂解液、原代细胞。
2.MTT法检测细胞存活和生长的方法：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在540 或720nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
3.利用蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot，与Hochest法分别测定6项血清中物质的浓度：天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、gamma;-谷氨酰转移酶的浓度水平反映肝功能，而血糖、血尿素氮和肌酸的浓度水平反映肾脏的功能。
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