一、实验背景
近年来宫颈癌病因学研究迅速发展，2008年诺贝尔生理和医学奖获得者德国科学家楚尔·豪森已确认人乳头瘤病毒(Human papilloma virus，HPV)的组成，并证实感染是宫颈癌的主要病因，发现HPVl6和HPV18是导致人类宫颈癌形成的主要两种HPV病毒类型。这一重大发现是日后HPV疫苗研发的根本依据。20世纪70年代以来，基因工程技术迅猛发展，外源基因能过克隆技术，以构建重组表达质粒或病毒的方式，导入宿主细胞中进行稳定的扩增及表达，解决了基因重组疫苗的原料问题。
人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一组嗜上皮组织双链小分子 DNA 病毒的总称。HPV是由DNA核心和蛋白衣壳组成的无包膜DNA病毒,大约含8千个碱基对，基因组主要包括3个区域:早期区(E区)、晚期区(L区)和上游调控区(URR)。E区编码早期蛋白，主要是E6和E7；L区主要编码衣壳蛋白L1和L2。
目前世界上已发现的HPV 有 200余种 , 共有 27 种可从宫颈癌组织中发现，以人为宿主的HPV病毒株。对生殖道黏膜有感染力的有30多种。HPV 主要有Alpha、Beta 和 Gamma 三个属。所有传统意义上生殖器或黏膜 HPV 都属于Alpha－属，是HPV 种类中最多、最为复杂的部分[1]，依据HPV引起的增生性病变是否致癌，可将其分为高危型和低危型两类：高危型：1 6，18，3 1，33，35，39，45，51，52，56，58，59，66，68，73和82等；低危型：6，11，40，42，43，44，54，61，70，72和81等。
据报道，由人乳头瘤病毒6、11 型等低危型别引起的尖锐湿疣，在我国发病呈逐年上升趋势已居我国性传播疾病的第二位，仅次于非淋菌性尿道炎(NGU)，本病具有传染性强，潜伏期长，易复发的特点。
尖锐湿疣还会造成患者非生殖器部位出现的乳头状瘤，可以导致眼结膜的乳头状瘤和口腔黏膜的乳头状瘤；尖锐湿疣会造成患者在平时生活中出现溃疡、出血，由于病变增大、增多后，可引起局部的异物和不适感；尖锐湿疣还会引起各种癌症，尖锐湿疣最严重的后果应该是恶性肿瘤；尖锐湿疣可通过胎盘传给胎儿，造成流产、早产、死胎或胎儿畸形，严重影响了患者的下一代健康。
尖锐湿疣属于性传播疾病的一种，反复发作又难以控制，有时疼痛较为严重，造成病人思想负担过重，而出现心理障碍，影响家庭和睦，甚至发生抑郁症，这些无形中的心理压力往往给青年人带来更大更深的影响。
目前尖锐湿疣的防治药物有：治疗性药物1、 VeregenTM：在2006 年 10 月30日获FDA 批准成为处方药，FDA批准第一个复合成分植物药，用于治疗人类乳突病毒（human papilloma virus, HPV）所引起的生殖器疣。；2、GS-9191；3、三氯蹄酸铵(AS101)：Friedman M 等认为 15% 的 AS101 软膏治疗尖锐湿疣是安全有效的，并且有良好的可耐受性；4 鬼臼毒素纳米制剂。预防性药物主要有HPV 疫苗、杀微生物剂(microbicides)。
根除相关 HPV 病毒的感染是抗复发和治愈本病的关键，其中新药的研制和应用研究是防治尖锐湿疣的重要环节 。针对HPV6和HPV11的疫苗可有效的控制该疾病的发生。研究证实，HPV主要衣壳蛋白L1在体外一定的条件下，能自组装成具有与天然病毒类似的颗粒结构，并能模拟病毒的表位，是一种良好的疫苗形式。
但目前HPV疫苗在发展中仍有许多局限性： 1、原核表达系统的局限性：(1)无修饰功能：肠杆菌表达系统存在最大的问题是，重组HPVL1蛋白很容易形成没有正确空间构象的包涵体，虽然包涵体蛋白纯化简单，但往往难以复性或者复性过程复杂，得率低，难以实现大规模的工业化生产。目前，由于HPV疫苗成本问题，人们尝试在大肠杆菌系统中表达和纯化。(2)内毒素：目前人们采用佐剂，铝盐用做免疫佐剂已经有80余年的历史,也是世界范围内使用最广泛的人用疫苗佐剂,。Cervarix和Gardasi使用的佐剂分别为无定型的羟基磷酸铝硫酸盐佐剂(AAHS, 225mu;g,一种新型的铝佐剂)和 AS04 佐剂。李仲艺等研究发现在高盐条件下，内毒素容易凝集，大都不结合疏水层析介质，会在上样的时候直接流穿而被去除。经过Butyl疏水层析，进一步降低了内毒素含量，并提高了目的蛋白纯度。2、病毒具有严格的宿主特异性：病毒复制与宿主细胞的分化和周期密切相关。这就导致了长期以来,人们无法在体外对HPV进行快速高效的常规单居细胞培养和组织培养,获得研究所需要的足够量的感染性病毒颗粒。
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
