- 研究背景
灵芝，又称仙草，是我国具有数千年药用价值的珍贵药材。灵芝作为传统中药，常用于治疗高血压、糖尿病和关节炎等疾病。现也用于胃癌、肺癌、淋巴瘤和白血病等多种肿瘤的治疗。Jiang等实验发现灵芝可以抑制乳腺癌浸润及增值，通过NF-kappa;B对细胞周期蛋白D1的负调节作用，使肿瘤细胞停滞在G0/G1期；李鹏等发现对H22移植瘤呈剂量依赖性抑制作用。灵芝孢子是灵芝生长成熟时从菌盖弹射出来的细小颗粒，卵形，一般呈淡褐色至黄褐色，是灵芝的生殖细胞，是其有效成分的集合体。现已证实，相对于灵芝，灵芝孢子具有更好的治疗效果。王筱婧等研究表明灵芝孢子粉能够抑制人肝癌细胞的生长；Wang等证实灵芝孢子能够诱导人白血病细胞THP-1细胞的凋亡。研究表明，灵芝及灵芝孢子的主要活性成分为灵芝多糖、蛋白及核苷类等。灵芝孢子油为黄色透明液体，是灵芝孢子粉经超临界CO2技术萃取所得，尽管有研究表明，灵芝孢子油具有抗肿瘤活性，但是对其抗肿瘤的主要活性成分并不明确。
研究表明，灵芝及灵芝孢子能够诱导肿瘤细胞凋亡，并抑制细胞增殖。灵芝孢子的乙醇提取物使MCF-7 细胞停滞于G1/S 期，其水提取物可引起hepatoma细胞G2/M 期捕获。但就其经超临界CO2 萃取所得的灵芝孢子油，目前并无明确研究表明它是以何种方式发挥抗肿瘤作用，对细胞周期又有怎样的影响。
本课题主要是研究灵芝孢子油的抗肿瘤活性，明确其抗肿瘤的活性组分，并从细胞凋亡和细胞增殖两个方面研究灵芝孢子油发挥抗肿瘤作用的方式。
二、研究目的与意义
1. 研究灵芝孢子油的抗肿瘤活性，明确其发挥抗肿瘤活性的主要活性组分；
2. 考察灵芝孢子油发挥抗肿瘤活性的作用方式。
三、实验方案设计
1. 灵芝孢子油及其提取物抗肿瘤活性的分析
体外培养A375细胞、A549细胞、HepG2细胞，接种96孔板。采用不同浓度的灵芝孢子油、不皂化物、脂肪酸干预48h。实验分为10组：（1）空白组：200ml培养基；（2）灵芝孢子油高浓度组：培养液中含2g/L灵芝孢子油；（3）灵芝孢子油中浓度组：培养液中含1g/L灵芝孢子油；（4）灵芝孢子油低浓度组：培养液中含0.5g/L灵芝孢子油；（5）不皂化物高浓度组：培养液中含0.4g/L不皂化物；（6）不皂化物中浓度组：培养液中含0.2g/L不皂化物；（7）不皂化物低浓度组：培养液中含0.1g/L不皂化物；（8）脂肪酸高浓度组：培养液中含1.6g/L脂肪酸；（9）脂肪酸中浓度组：培养液中含0.8g/L脂肪酸；（10）灵芝孢子油低浓度组：培养液中含0.5g/L灵芝孢子油。培养48h后，MTT法检测细胞活力，明确灵芝孢子油及其提取物的抗肿瘤活性。
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