开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、研究内容
由于miR-375在正常胃癌细胞与正常胃黏膜上皮细胞中表达水平差异较大，所以miR-375可能作为一个抑癌分子发挥重要的作用，本课题通过多方面实验详细阐述miR-375在胃癌中抑制肿瘤干性的作用。
通过实验观察在细胞中过表达miR-375水平是否可以下调细胞干性相关基因蛋白及mRNA水平的表达，反之如果抑制miR-375本底水平较高的细胞表达miR-375，干性相关基因是否会有所上调。之前文献报道miR-375可以靶向JAK2-STAT3通路并抑制此通路表达，所以猜测miR-375的表达可以通过JAK2-STAT3细胞信号通路抑制胃癌细胞干性的表达。通过改变miR-375表达变化检测肿瘤细胞形成干细胞微球的能力，以及将过表达miR-375及抑制miR-375的肿瘤细胞接入小鼠，通过与空白对照组相比检测小鼠肿瘤形成能力，通过两种方式侧面反映肿瘤细胞干性。
二、研究方法
- 确证miR-375是否可调控胃癌细胞干性标志分子的表达
a、转染miR-375 mimics，NC进入SGC-7901，qPCR检测转染效率，同时检测干性标志分子OCT3/4,ALDH1A1,Nanog,SOX2转录水平，WB检测翻译水平。
b、转染miR-375 inhibitor，NC进入BGC-823，qPCR检测转染效率，同时检测OCT3/4，ALDH1A1，Nanog，SOX2转录水平（同上）转染miR-375 miR-375 mimics，NC，inhibitor，NC进入GES1，qPCR检测转染效率，同时检测干性基因转录水平（同上）。
- 确证miR-375是否可调控胃癌细胞成球能力
a、构建miR-375慢病毒过表达稳转细胞株LV3-miR-375及抑制稳转细胞株LV3-miR-375-shRNA。
b、准备成球培养基体系：DMEM/F12，B27，EGF，bFGF，heparin，将两种不同细胞与成球培养基混合铺在低粘附六孔板，每板铺细胞约3000个，一个成球周期（7天）后通过荧光显微镜拍摄肿瘤细胞球大小与数量。
- 确证miR-375可以降低胃癌表面CD44表达
分别转染miR-375 mimics，NC与miR-375 inhibitor，NC进入SGC-7901，BGC-823，48h后收集细胞，通过CD44抗体标记后通过流式细胞术检测CD44表达。
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