开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
- 拟研究的问题
乳腺癌的发病率在我国女性恶性肿瘤中居于首位[1]。近年来发现肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)是肿瘤产生耐药性的根本原因,抑制CSCs的形成可逆转肿瘤细胞对阿霉素的耐药[2]。然而,迄今为止,乳腺癌CSCs形成或发展的具体机制尚未明确。因此,研究调控乳腺癌细胞干性的具体机制具有重要意义。
二.实验主要内容:
1.确证RNA结合蛋白RNPC1是否可调控乳腺癌细胞干性标志分子的表达;
2.确证RNPC1是否可调控乳腺癌细胞成球能力;
3.确证RNPC1是否可调控乳腺癌细胞中CD44 /CD24--干性细胞群比例;
4.初步探索RNPC1调控乳腺癌细胞干性的机制。
- 实验方法
- 基因沉默技术与基因过表达技术:正向与反向验证基因的功能
基因沉默技术(RNAi):根据靶基因序列设计并合成 siRNA序列,转染后实现对靶基因的短时沉默;根据 siRNA 序列设计并构建 shRNA 表达载体,慢病毒包装后感染细胞实现对靶基因的长效沉默。
过表达技术: PCR 扩增或者合成靶基因序列,与表达载体定向连接,构建基因过表达载体,慢病毒包装感染细胞后实现对靶基因的过表达作用。
2、Western blot:在蛋白水平检测基因的表达情况
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