研究背景
肺纤维化（pulmonary fibrosis）是一种以肺泡壁细胞浸润、增厚、间质纤维化为特征，发病机制不明的呼吸系统性疾病。中医古籍中没有与肺纤维化完全对应的病名，据其临床表现为咳嗽、咳痰，后期出现进行性加重呼吸困难等症状，且呈慢性、反复发作，多数学者将其归为“肺痿”“肺痹”“肺胀”“络病”“喘证”“咳嗽”等范畴，肺痹与肺痿最为多见[1]。其临床缺乏有效治疗方法，病死率高[2]，不可逆转，是目前医学界迫切需要解决的问题，2014年10月美国FDA 批准用于特发性肺纤维化治疗的吡非尼酮和尼达尼布，也只能延缓肺纤维化发展的进程[3]。百部为始载于《名医别录》的常用中药，为中医治疗肺纤维化常用的组方药物。《本草汇言》 (明·倪朱谟) 中记载的治疗肺痿的古方，其组成为百部、薏苡仁、百合、麦门冬各三钱，桑白皮、白茯苓、沙参、黄方耆、地骨皮各一钱五分，用于治疗久嗽不已、咳吐痰涎、重亡津液、渐成肺痿[4]。
本课题拟建立PM2.5联合BLM致小鼠肺纤维化的模型并研究百部汤对小鼠肺纤维化的改善作用。由于目前缺少治疗肺纤维化的药物，通过本课题的研究可以为研发更高疗效的治疗药物提供思路。
研究方法
制备百部汤浸膏，经气管软管环间隙向小鼠气管插管注射博来霉素溶液建立肺纤维化小鼠模型，连续给药 14 d，每天灌胃给药百部汤。分离肺组织，观察肺组织病理改变情况。
文献综述
- 肺纤维化概述及相关研究
肺纤维化( PF) 是一种原因不明、局限于肺部，以纤维化伴蜂窝状改变为特征的疾病,是一种慢性、进行性、不可逆性肺部疾病。中药的抗纤维化作用呈现多靶点的特点，常用黄芪、丹参、川芎、甘草、姜黄等单味药材或是中药复方，其可通过降低炎性细胞因子水平， 抑制促纤维化因子表达及阻断相关信号通路等机制发挥作用[5]。欧阳燕等［6］对 36 只雌性昆明小鼠进行了研究，将其分为正常组、博莱霉素组和黄芪治疗组。他们通过对肺组织病理形态和超氧化物歧化酶、丙二醛等指标发现黄芪治疗组可显著改善小鼠的肺组织病理形态。徐昌君等［7］研究认为，黄芪延缓 PF 进程与抑制肺组织炎症反应、下调 TGF-beta;1表达有关。江茵等［8］通过实验说明川芎嗪对抗 PF 的机制可能是通过抑制结缔组织生长因子实现的。叶进燕等［9］将 90 只肺纤维化大鼠随机分为对照组、模型组和甘草皂苷组，结果显示，甘草皂苷组的肺组织炎症和纤维化程度均明显改善，并提示甘草皂苷可能通过抑制 TGF- beta;1表达起到延缓 PF 进程的作用。赵成江[10]得出姜黄素可以降低大鼠肺组织中的羟脯氨酸水平，从而改善肺功能;杨长福等[11]应用免疫组化法和免疫蛋白印迹法发现药对桑白皮、百部对肺纤维化有明显干预作用；熊立[12]采用免疫组化法测定肺组织 IFN-gamma; 及 IL- 4蛋白表达水平表明复方银杏颗粒改善肺纤维化机制可能与调控 Th1/Th2 信号通路有关。敬岳等[13]应用Masson 染色法，用 IPP 软件( Image Proplus) 分析并选取视野中肺组织胶原沉积面积与肺组织总面积比值进行统计学分析，按 ELISA 试剂盒提示的操作步骤说明进行肺组织匀浆上清液中相关炎性介质含量,结果表明补肺活血胶囊可通过下调TNF－alpha;、 IL－6 在肺局部的分泌从而减轻局部炎症反应，延缓肺组织损伤修复过程，降低肺组织胶原沉积及纤维化样变。
- 小鼠肺纤维化模型建立
目前用于建立肺纤维化动物模型的诱导剂以博来霉素最为常用[14]。1974年Adamson等首次采用腹腔多次注射博莱霉素的方法建立了肺纤维化动物模型[15]。大量实验证实博来霉素可以经尾静脉注射、气管灌注和腹腔注射等多种途径给药。气管灌注给予博来霉素是目前国内外公认的比较成熟的肺纤维化动物模型，但这种方法也存在肺纤维化程度不一和病灶分布不匀等明显缺点。有研究发现[15]气管滴注法虽然操作简单,成本低，然而病变范围比较局限,与人类病变的弥漫性分布有差异；尾静脉注射给予博来霉素会使模型动物出现胃肠道反应和尾巴肿胀坏死的情况。张晓晔等[16]对雌性小鼠一次性尾静脉注射博来霉素150 mg成功复制出肺纤维化模型，但造模后小鼠死亡率高且病变部位主要分布于胸膜下及血管周围，与人类弥漫性分布状况不符。王鹤[15]等发展一种雾化吸入给药的方法，并对气管灌注、尾静脉注射和雾化吸入三种给药方式进行了比较，结果表明雾化吸入给药途径制备的肺纤维化模型，肺组织整体严重程度为中度，肺部损伤程度一致，病理变化稳定，肺纤维化症状分布较气管灌注和静脉注射更为均匀，其中多次雾化吸入模型组较单次雾化吸入模型组各评价指标程度显著，较另外两种方法有明显的优势。综上所述，雾化吸入给药建模效果最好但存在经济成本高的问题，气管滴注方法应用剂量小和可重复性强，综合考虑气管滴注法更优。也有研究者发现随着我国大气PM2.5 值上升，肺纤维化患者数量亦明显增加，表明PM2.5 与肺纤维化间存在联系。李清兰[17]等在使用中流量多级颗粒采样器采样，将吸附有PM2.5颗粒的石英滤膜放入超纯水中，超声洗脱PM2.5颗粒物，处理样品洗脱液制备成PM2.5样品储备液，对博来霉素造模后的小鼠气管滴注PM2.5样品液，结果表明PM2.5会加重博莱霉素导致的肺部病理改变。敬岳[13]在研究补肺活血胶囊对颗粒物致小鼠肺纤维化的影响中，对小鼠鼻腔滴注PM2.5悬液建模结果显示PM2.5 悬液可致模型小鼠肺组织气管增厚，肺泡间隔增宽且出现明显的纤维化。
参考文献
[1]刘晓,于文涛,靳贺超,等.补肾通络方对肺纤维化大鼠肺组织TGF-beta;_1/Smads通路的影响[J].中国实验方剂学杂志,2019,25(02):96-102.
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