开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、实验背景及目的
血栓的生成与许多心脑血管疾病的发生密切相关,例如脑卒中和心肌梗死等。脑卒中(cerebral stroke)是一种急性脑血管疾病,包括出血性脑卒中和缺血性脑卒中,其中缺血性脑卒中约占脑卒中发病总数的60 %-70 %。缺血性脑卒中具有很高的致残率和致死率,容易产生运动障碍、认知障碍和偏瘫等危害[1]。血栓的发生与炎性反应、氧化应激、能量代谢改变等密切相关。由于发病机制相对复杂,目前临床上仍旧没有彻底有效的治疗方案。
丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根茎,具有扩张血管、抗动脉粥样硬化、改善微循环等药理作用,目前广泛应用于心脑血管系统疾病的治疗。研究表明,丹参的水溶性成分丹酚酸具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、神经保护等作用,能够抑制疾病发生过程中炎性介质和活性氧(ROS)的释放,减轻能量代谢障碍,从而对心脑血管疾病,如缺血性脑卒中起到保护作用。斑马鱼作为一种新的模式动物,具有体积小、成本低、周期短、实验结果可靠等特点,在中药活性筛选、毒性和代谢研究等方面较其他动物模型具有一定的优势。基于此,本实验旨在考察丹参活性成分抗氧化炎、抗炎氧化的药理活性,以及通过建立斑马鱼血栓模型,筛选丹参中具有抑制血栓形成作用的活性成分。
二、研究内容和研究手段
1、活性氧(ROS)的含量测定
融合度为70 %-80 %的微血管内皮细胞(bEnd.3细胞)经胰酶消化后,离心重悬,接种于48孔细胞培养板。实验分为:空白对照组,LPS组,LPS 原儿茶醛(PCA)组,LPS 二氢丹参酮 I(DT)组。细胞过夜培养后,加入相应的药物和刺激剂,使用活性氧检测试剂盒,用多功能酶标仪在激发光488 nm,发射光525 nm处测定ROS的荧光强度。
2、促炎因子白细胞介素-6(IL-6 )的含量测定
融合度为70 %-80 %的bEnd.3细胞经胰酶消化后,离心重悬,接种于48孔细胞培养板。实验分为:空白对照组,LPS组,LPS PCA组,LPS DT组。细胞过夜培养后,加入相应的药物和刺激剂,使用ELISA检测试剂盒,用多功能酶标仪在450 nm处测定吸光值,通过标准曲线计算IL-6的含量。
3、乳酸的含量测定
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