融合蛋白表达及纯化方法学研究文献综述

 2023-02-10 08:02

1.课题要求本实验主要进行融合蛋白的表达与纯化探索。

将基因工程菌在TBK培养基中诱导表达,对诱导剂种类,诱导温度,诱导时长进行优化。

ATS均质机压力破碎菌体获得可溶性蛋白后,进行盐析等方法进行分离纯化。

探索并优化建立表达,纯化方法。

2.研究背景融合蛋白(fusion protein),它表达两种不同的含义,第一种是利用DNA重组技术获得的两个基因重组以后的表达产物,第二种是介导两个细胞质膜融合的一种蛋白。

两个不同的蛋白质既可以通过化学方法也可以通过基因的融合而形成一个大分子。

融合蛋白技术是为获得大量标准融合蛋白而进行的有目的性的基因融合和蛋白表达方法,利用融合蛋白技术,可构建和表达具有多种功能的新型目的蛋白。

融合基因既可在原核细胞(如大肠杆菌) 也可在真核细胞中进行表达。

3.研究意义基因融合技术最早即是被用来在细菌(主要是大肠杆菌)中表达外源蛋白,如 somatostatin4、insulin5等,对于外源基因(尤其是真核基因),利用融合表达的方法在大肠杆菌中表达有很多优点,一是由于外源基因一般是被连接到可供融合的蛋白的C端编码序列之后,因此不需另外设计SD序列,同时,N端融合基因的存在,使得外源基因的表达相对比较容易。

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