开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、拟研究的问题
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, h.p ylori)是世界卫生组织(WHO)分类的I类致癌物，长期存在于人的胃中。大多数患者发展成无症状的慢性胃炎，感染可以持续一生。然而，10%-20%的患者会发展为消化性溃疡，0.1%-4%的患者将遭受两种胃恶性肿瘤：黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃腺癌。 H. pylori可以通过改装并减弱其病原体广泛共存的相关分子模式的免疫原性, 调控固有免疫细胞和T细胞的免疫应答来逃避免疫系统的识别和清除, 导致持续感染. 深入了解H. pylori感染引起的免疫应答,为逃逸机制提供参考。 对于消除H. pylori感染, 控制H. pylori感染相关性疾病的发生具有极其重要的意义[1]。我们刚得到两株菌株，将进行幽门螺旋杆菌相关炎症的研究。
- 实验主要内容
本实验的研究包括以下几项内容：
1.幽门螺旋杆菌培养，革兰氏染色观察细菌形态
2.细菌DNA提取及琼脂糖电泳
3.小鼠灌胃实验，胃部DNA提取，qPCR法或平板法计算定植量
4. HE染色实验，流式检测胃部炎症细胞
- 实验方法
- 幽门螺旋杆菌培养，革兰氏染色观察细菌形态
在37℃的温度下，把幽门螺杆菌SS1放在平板上培养3天。收集细菌并重新悬浮在磷酸盐缓冲盐水( PBS )中。将洁净玻片置于实验桌上，用移液枪吸取 1mu;l 菌悬液于玻片上，涂片干燥，在标本上先加草酸铵结晶紫染色，然后加碘液煤染，再加95%乙醇脱色，最后用复红复染，油镜下观察结果。
- 细菌DNA提取及琼脂糖电泳
取细菌悬液用10000rpm离心1min，倒尽上清液，加200mu;l缓冲液GA，振荡之彻底悬浮。加入Proteinase K混匀后，在56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠。加入200mu;l缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。加入200mu;l无水乙醇，充分振荡混匀15s，此时可能会出现絮状沉淀。将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中，12000rpm离心1min，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱CB3中加入500mu;l缓冲液GD，12000rpm离心1min，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱CB3中加入600mu;l缓冲液PW，12000rpm离心1min，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。重复上一步骤。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，已彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100mu;l洗脱缓冲液TE，室温放置3min，12000rpm离心2min，将溶液收集到离心管中。取HFF10mu;l加90mu;l的水制成稀释液，同理制HPF稀释液。样品用PCR扩增，制作琼脂糖凝胶，进行琼脂糖电泳，电压120V，时间20min，紫外灯下观察。
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