一．研究背景
生物碱的发现始于19世纪初，是研究得最早而且最多的一类有生物活性的天然有机化合物。据统计，1952年以前共发现生物碱950种[1]，到1962年达到1107种，1972年又上升到了3443种[2]，目前已发现生物碱约6000种，并且仍以每年约100种的速度递增着[3]。
我国17世纪初的《白猿经》中记载了从乌头中提取出砂糖样毒物作为箭毒用，用现代的经验分析推测它应该是乌头碱。此外，1806年德国科学家Serturner从鸦片中分离得到吗啡、1810年西班牙医生Gomes从金鸡纳树皮中分得结晶Cinchonino（奎宁与辛可宁的混合物）。1819年Weissner把这类植物中的碱性化合物统称为类碱（alkali-like）或生物碱，后者一直沿用至今。
生物碱（alkaloid）是存在于生物体（主要为植物）中的一类含氮的碱性有机化合物，大多数有复杂的环状结构，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。例如，阿片中的镇痛成分吗啡、止咳成分可待因，麻黄的抗哮喘成分黄麻碱、颠茄的解痉成分阿托品、长春花的抗癌成分长春新碱等等。生物碱大多数来自于植物中，其中双子叶植物类的豆科（Leguminosae）、茄科（Solanaceae）、放己科（Manispermaceae）、罂粟科（Papaveraceae）和小蘖科（Berbereaceae）等科属含生物碱较多[4]。生物碱在植物中的含量一般都比较低，大多都少于1%。例如长春花中的长春新碱含量仅为0.0001%[5]，一般含量在0.1%以上就算比较高了。由于植物中成分非常复杂，又含有无用成分和有毒成分，因此为了提高治疗效果，就要最大限度的提取有效成分，所以如何提取和分离纯化生物碱，吸引了人们的广泛关注。
目前运用于临床的生物碱药品已经有80余种，具有显著的抗肿瘤活性[6]、镇静止痛作用[7]、降压[8.9]、抑菌和抗疟作用，而且生物碱是一种高效、低毒、低成本、无污染、对人畜安全的天然产物。正是由于这些作用，对于生物碱的提取、分离和纯化的研究已经成为当前热点，更多具有独特药用价值的生物碱需要不断被发现和应用。
生物碱可以用多种分离纯化方法进行纯化。常用的分离纯化方法有：氧化铝柱色谱法、硅胶色谱法、大孔树脂法、离子交换法、高效液相色谱法、高速逆流色谱等[10.11]。但是这些方法各有利弊，大孔树脂上样量大同时样品损失量也大；而硅胶色谱法由于硅胶吸附性较强，不容易将样品洗脱下来；离子交换和氧化铝色谱适合生物碱的分离，但是由于发酵液萃取得到的生物碱粗品含量低，也不适用；研究表明高速逆流色谱法适用于少量生物碱的分离纯化[12.13]，分离效果好，但是存在设备仪器成本高的问题；制备型高效液相色谱有分离效能高、分析速度快、检测灵敏和应用范围广等特点，综合考虑成本、设备等问题的考虑，制备型高效液相适合用于本课题所得到的生物碱的分离，进样量较分析型高效液相色谱大，适合少量生物碱的分离，但用HPLC分离时可能会存在线性响应差、峰拖尾、洗脱液组成复杂等问题[14].
二．研究目的和意义
伴随着科技技术的不断进步和发展，以及各种罕见疾病的出现，我们迫切的需要把生物碱分离纯化出来，并对其独特的药用价值进行开发，为社会和人类做出贡献，所以非常有必要对其进行研究。
本课题在金钗石斛内生菌CPU0029的基础上，对其进行发酵培养（改良PDA培养基），用氯仿萃取、旋蒸获得目的物生物碱，然后用高效液相进行定量检测，最后分离纯化。
三.实验内容
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