开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 研究目的：对我国近年多分支的H5亚型高致病性禽流感病毒（HPAIV）全基因组氨基酸序列进行分析，找出与禽流感病毒耐药性相关位点，综合分析我国近年H5亚型HPAIV的耐药性规律。
- 研究内容及研究手段：选取毒株用药物定向诱导并传代，将耐药毒株提取后测序并与原代对比，找出突变位点，查阅相关文献总结耐药性规律。
- 主要成果形式：论文。
本课题工作进度：3月下旬 查阅文献，确定研究手段；4月 诱导毒株并传代，筛选耐药株，将原代株与耐药株基因组进行对比确定突变位点；5月上旬 查阅文献；5月中旬 综合分析H5亚型耐药性规律；5月下旬 总结全部实验过程，书写论文。
多分支H5亚型高致病性禽流感病毒的耐药性分析文献综述
摘要：近年来，高致病性 H5N1 亚型禽流感（HPAI），给世界的养禽业带来了巨大损失，并且对人类的生命安全构成了一定的威胁。1997 年，香港首次发生了 H5N1 亚型禽流感病毒（AIV）直接感染人事件，此病症引起全世界卫生组织的高度关注。目前，所使用的抗流感病毒的药物主要可以分为两类，即 M2 离子通道阻断剂和 NA 抑制剂。但随着抗病毒药物的不规范使用，流感病毒抗药性毒株的数量也在逐年增加。本研究计划针对多分支H5亚型高致病性禽流感病毒全基因组氨基酸序列进行分析，找出病毒耐药性相关位点，并综合分析耐药性规律。
关键词：禽流感病毒 H5亚型 耐药性 基因测序
正文：禽流感病毒（AIV）属甲型流感病毒。流感病毒属于RNA病毒的正黏病毒科，分甲、乙、丙3个型。其中甲型流感病毒多发于禽类，一些亚型也可感染猪、马、海豹和鲸等各种哺乳动物及人类；乙型和丙型流感病毒则分别见于海豹和猪的感染。甲型流感病毒呈多形性，其中球形直径80～120nm，有囊膜。基因组为分节段禽流感病毒单股负链RNA。依据其外膜血凝素（H）/和神经氨酸酶（N）蛋白抗原性的不同，目前可分为16个H亚型（H1～H16）和9个N亚型（N1～N9）。
正如细菌会对抗生素产生耐药性一样，流感病毒也会对抗病毒药物产生耐药性，出现这种耐药性最主要的原因就是遗传物质易发生突变。遗传物质在传递过程中，要进行自我复制，复制时会随机发生错误，DNA的复制有一套校对机制来纠正错误，而流感病毒的遗传物质是RNA，不具有这样的机制，所以在复制过程中出现的错误都会被保留下去。这会大大增加病毒产生耐药性的几率。在治疗过程中，耐药情况一旦发生，原本有效的抗病毒药物的抑制病毒复制能力就会大大降低。同时，耐药会导致病情反复、疾病进展等不良后果，而药物之间的交叉耐药也会给后续治疗的选择带来极大的困难。
本次研究拟选取三株不同来源且无耐药性的H5N1病毒，首先将病毒纯化并扩增，然后用不同浓度梯度的抗病毒药物（常用的有金刚烷胺、金刚乙胺等）进行诱导并传代，设定阴性对照组，定期筛选，测定病毒的IC50数值（半数药物抑制浓度），判断是否产生耐药性。发现耐药株后，经过提毒、反转录、PCR（聚合酶链式反应）、鉴定、回收、测序等步骤，将筛选出的耐药病毒与初始病毒基因相对照，找出突变位点以及相对应的氨基酸。根据相关信息，抗金刚烷胺类突变株类型主要有L26F、V27A、A30T、S31N、G34E。检索NCBI流感数据库，搜集流感病毒的抗药性序列进行统计，综合归纳我国近年H5亚型禽流感病毒的耐药性规律。
小结：通过一系列实验，最终确定多分支H5亚型禽流感病毒耐药性突变的相关位点，以及相对应的氨基酸，并分析总结我国近年来H5亚型病毒产生耐药性的规律。但由于病毒种类繁多，来源广泛，加之研究时间有限，最终所得结论准确性有待考证。
参考文献：[1]赵敏，陈菊梅；2008年我国几种传染病的流行动向[J]；传染病信息;2009年01期.
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