一、课题背景
上世纪70年代初美国注射牛胶原蛋白，用于祛除皱纹及修复疤痕，日本也研究开发胶原蛋白应用于整形美容领域。我国是畜牧业和水产业大国，但对天然胶原蛋白的获取主要途径是畜禽源动物。宗教信仰、畜禽源疾病加之原料加工过程中的浪费，因而利用海洋生物提取胶原蛋白备受瞩目。海蜇是一种广泛分布于我国沿海地区的钵水母纲刺胞动物，其中胶层含有丰富的胶原蛋白。
虽然胶原蛋白已被应用于医疗、美容行业，但对其促伤口愈合的研究较少。相关研究表明，胶原蛋白可降解为许多相对分子质量不同的胶原肽，而胶原蛋白及胶原肽都具有促进伤口愈合的作用，但对于它们的药效比较还没有相关研究；对于相关药物促伤口愈合的最适浓度也没有相关探索。
迄今为止，依据提取介质的不同，胶原蛋白的提取方法分为5类：酸法提取、碱法提取、酶法提取、盐法提取及热法提取。体外蛋白酶水解胶原蛋白制备胶原蛋白肽时不仅降解所耗的时间短、产品营养流失较少,而且不污染环境,所以—般采用蛋白酶水解胶原蛋白的方法提取胶原蛋白肽。[1]本实验采用酶法提取。
- 要解决的问题
- 酶法提取胶原蛋白的最佳酶解时间（24h或48h）
- 胶原蛋白/胶原肽与相关伤口愈合药物对伤口愈合的药效对比
- 胶原蛋白/胶原肽对伤口愈合的最适浓度
- 可行性分析
理论分析：由相关文献查得胶原蛋白及胶原肽确实具有促伤口愈合的作用，胶原蛋白与不同相对分子质量的胶原肽药效的确有高低之分，浓度因素也是影响药效的一个重要原因。
研究方法分析：本实验提取相关物质采用酶解法，是目前提取相关物质已有的一个方法。小鼠模型能够控制伤口深浅大小一致，且能排除小鼠自身对伤口造成的影响。观测凝血时间、伤口愈合度、愈合情况、体重增长趋势及HE染色法确保实验数据的可靠性，实验数据用统计学原理能够客观地分析。
预实验结果分析：观察纤维细胞的迁移确定药效。
- 研究方法和内容
1、海蜇胶原蛋白的提取
盐浸海蜇脱盐处理：取一定质量海蜇丝（约40g），剪刀剪碎处理，放入组织捣碎机中匀浆5min左右，纱布过滤；室温下浸没于2倍海蜇湿重的去离子水中，放置在混合器上24h。
碱处理：将上述沉淀移入烧杯中，滤出液体除去上清液，下层胶状沉淀置于离心机，4℃，4000rmp条件下作用5min。将沉淀混合，按1:7.5（w:v）比例加入1%氢氧化钠溶液，电磁搅拌下置于4℃冰箱中处理24小时。将处理后的混合物置于离心机，4℃，4000rmp条件下作用5min
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