抗乙型肝炎病毒化合物筛选
1、研究背景
乙型肝炎病毒（HBV）是一种dsDNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科，完整的乙肝病毒成颗粒状，也会被称为Dane颗粒。HBV全长3.2kb，拥有不完全双链的环状基因，编码四种蛋白，分别为病毒聚合酶、核心蛋白、表面蛋白及X蛋白（一种可能的转录激活因子）。乙肝病毒颗粒首先与宿主细胞膜上的特异受体结合，脱去外膜进入胞内，脱壳，最终HBV DNA进入细胞核，并在细胞核内形成闭合的共价环状超螺旋结构（cccDNA），并以此作为模板，合成前基因组RNA（pgRNA）及其它mRNA [4]。在新组装的核壳体内，HBV通过病毒聚合酶RNA依赖的DNA聚合活性，以pgRNA为模板进行全长负链的合成，并以此为模版，依赖聚合酶DNA依赖的DNA聚合活性，合成不完全的正链。经过内质网和高尔基体对其表面蛋白的加工修饰，形成具有感染性的病毒颗粒，分泌到胞外。而目前对于乙肝的治疗药物，主要有干扰素，核苷类药物以及中药类。在抗HBV药物的研究报道中，体外细胞模型HepG2.2.15细胞系是目前国际公认的最为理想的抗HBV药物体外筛选及研究的实验模型。该细胞株是用2个头尾相连的HBV DNA全基因的重组质粒转染受体细胞HepG2而成，可以表达全部病毒标志物，能长期稳定地向培养上清中分泌HBsAg、HBeAg和完整的Dane颗粒，还能产生大量的病毒复制中间体。本实验体系即以此细胞系作为研究对象，在细胞水平上进行一系列化合物的抗HBV活性作用筛选。
2、研究目的
在稳定转染了HBV全基因组的HepG2.2.15细胞中，观察受试化合物在体外抗HBV生物活性，明确其对细胞培养上清中HBV-DNA以及HBV特异性抗原HBsAg和HBeAg含量水平的抑制强度，并进行比较。同时MTT法进行化合物的细胞毒性检测。从一系列化合物中发现了具有高效抗HBV活性的小分子化合物，并初步探索其可能的作用机制。
- 研究内容和研究手段
3.1实时荧光定量PCR（Real-time PCR）法检测化合物对HepG2.2.15细胞培养上清中HBV DNA的影响。
3.2 ELISA法检测化合物对HepG2.2.15细胞培养上清中HBsAg/HBeAg分泌的影响
3.3 MTT法检测化合物的细胞毒性
3.4 Southern Blot 法验证活性化合物对细胞质内病毒复制中间体的水平的影响
- 成果形式
4.1 化合物抗HBV活性以半数抑制浓度IC50表示
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