一、选题背景与研究意义研究表明，前列腺六次跨膜上皮抗原1(STEAP1)在黑色素瘤、前列腺癌、头颈部鳞状细胞癌等多种类型的癌症中过表达，可以作为理想的抗肿瘤疫苗靶点。
但STEAP1作单靶点抗原的免疫原性较差，需配合免疫佐剂以及增加抗原拷贝数加强其诱导的免疫应答。
分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)可以显著提高负荷抗原的免疫原性，上调细胞免疫反应，增强机体的免疫应答。
因此，可以通过构建HSP65与4STEAP1186-193重组质粒，其表达产物以HSP65充当蛋白质载体和佐剂增强STEAP1的免疫原性，得到HSP65与4STEAP186-193的融合蛋白(HHST4)。
后续以融合蛋白HHST4致敏DC制备DC疫苗，进一步研究DC疫苗对肿瘤的抑制作用，对纯化蛋白质做初步药效实验。
二、研究内容及方案1.对实验室保存的菌种pET-28a-His-HSP65进行质粒提取2.设计4STEAP1186-193基因序列，送至第三方公司合成根据GenBank上，Hsp65基因的CDS序列(查询编号：M15467)和STEAP1基因的CDS序列(查询编号：AK144312.1)，用Primer5设计引物。
3.酶切、酶连获得重组质粒以质粒pET28a-His-HSP65为模板，加入引物，通过PCR扩增得到His-HSP65基因，用限制性内切酶对PCR产物进行双酶切获得His-HSP65基因片段；将合成的pUC质粒（含4STEAP1186-193基因）进行双酶切，获得4STEAP1186-193基因片段。
将双酶切后的空载pET-28a质粒片段、His-HSP65基因和4STEAP1186-193基因进行酶连获得重组质粒。
4.氯化钙法制备感受态细胞5.重组质粒的转化将靶质粒转化至感受态大肠杆菌BL21(DE3)中，获得的重组菌株能够诱导融合蛋白HHST4的表达。
6.阳性克隆筛选7.菌落PCR及酶切验证8.测序验证三、文献综述肿瘤疫苗用于黑色素瘤治疗的研究进展摘要恶性黑色素瘤是一种由异常黑素细胞过度增生引发的恶性程度极高的肿瘤。
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