风疹病毒蛋白的基因工程表达及纯化文献综述

 2023-02-12 08:02

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

一、课题解决的问题

风疹是由风疹病毒(rubella virus, RV)引起的急性呼吸道传染病。RV最严重的危害是经垂直传播导致胎儿先天性感染,未感染过RV的孕妇,以孕期3个月内感染RV对胎儿危害最大,可引起胎儿死亡或出生后表现为先天性心脏病、耳聋、白内障、智力发育低下等畸形,称为先天性风疹综合征(CRS)。本课题通过对风疹蛋白的纯化表达,能够定性的进行分析测定,制备风疹疫苗,大大降低孕妇感染风疹而导致新生儿先天性感染的风险,具有极高的应用价值。

二、研究方法和技术路线

解冻菌种,于超净台先后加入200微升氨苄青霉素(Amp)和80微升菌种到LB培养基中,混匀,封口,37C培养箱扩大培养过夜;第二日进行扩大,4瓶扩大至16瓶,新培养基每瓶任需加入氨苄青霉素200微升,封口,37C,180rpm摇床1-1.5h;适当时间后,观察到培养基变得混浊变白,每瓶加入40微升IPTG诱导,时间4h,温度25C,去掉滤纸;将菌液转移至离心杯中,配平离心,8000rpm,20min,去上清,得细胞;每个离心杯加入适量PB裂解液(现配现用),玻璃棒搅拌使细胞完全分离开,平均分入三个烧杯,超声波破碎;收集合并破碎后的菌液,离心,取上清,抽滤除去残余细胞;准备GST胶与超滤的蛋白混合,加入磁力搅拌子,保鲜膜封口,4C搅拌过夜;取出过夜的胶和蛋白,搅匀,抽滤去溶液,胶保持湿润;最后洗下目的蛋白回收GST胶。主要运用了基因克隆及表达、蛋白纯化、酶联免疫、细胞培养、

Western blot等蛋白鉴定技术。

三、论文课题研究进度安排

2016年3月04日----3月10日 确定选题,查阅文献。

2016年3月10日----3月25日 撰写开题报告。

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