含D-氨基酸的蛋白质在大肠杆菌中的表达及纯化一、研究背景作为所有生物体的功能体现者的蛋白质，在生命体系中有极其重要的作用。
他们不仅催化着细胞结构的构筑单元和细胞新陈代谢，而且在细胞内、外的信号传导，细胞形态学和稳定性中都极为重要。
蛋白质仅使用了20种天然氨基酸来执行一系列显著功能，但是仅有的20种天然氨基酸携有的功能基团数量有限，并没有办法满足在化学、生物科学等领域中对蛋白质结构和功能的需求[1]。
通过基因定点突变、化学修饰和计算机辅助蛋白质设计，可以对蛋白质的结构改造赋予新的功能[2]，但是以上方法基于20种天然氨基酸本身[3]，进行修饰改造的功能基团只有巯基、羟基、羧基、氨基等几种基团，十分有限[4]。
然而具备特殊性质的或带有特殊化学基团和生物基团的非天然氨基酸能弥补这方面的空缺。
通过引入新的非天然氨基酸能够插入生物物理探针，达到分析蛋白质结构的目的，并且提高蛋白质的活性，产生新的功能。
目前对于非天然氨基酸的引入有如下几种方法：1、体外人工合成科学家们利用固相肽合成技术，合理操作多肽结构。
但其缺点是难以合成超过500-100的氨基酸肽链[5]。
为解决此问题，可以采用半合成技术，即通过连接短肽链，从而形成完整大分子蛋白[6，7]但是，这种方法也因化学基团的保护，蛋折叠约束及细胞外合成技术的缺陷而受到限制。
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