敲除PDK蛋白基因对PDHA磷酸化水平影响研究一、摘要(Abstract)筛选PDK1，PDK2,PDK3,PDK4的单克隆细胞，利用CRISPR技术敲除MEF细胞基因组中PDK1,PDK2,PDK3,PDK4蛋白的基因，观察WT和KO细胞中PDHA的磷酸化水平变化。
二、背景(Background/Introduction)葡萄糖稳态受损是引起代谢疾病的危险因素之一，包括肥胖、2型糖尿病和癌症。
在葡萄糖代谢过程中，丙酮酸脱氢酶复合物(PDC)调节了一个主要的调控步骤，即丙酮酸氧化脱羧作用到乙酰辅酶a的不可逆反应。
PDC的严格控制至关重要，因为它在葡萄糖处理中起着关键的作用。
而PDC活性受到丙酮酸脱氢酶激酶(PDK1 - 4)和丙酮酸脱氢酶磷酸酶(PDP1和2)磷酸化的严格调控，PDKs和PDPs表现出独特的组织表达模式、动力学特性和调控分子的敏感性。
在过去的几十年里，在患者和哺乳动物的组织中都观察到PDKs的上调，这表明抑制这些激酶可能对治疗代谢性疾病有好处。
三、名词和技术介绍1.ligase independent cloning (LIC)利用特殊设计含有同源臂的载体连接一段也带有同源臂的基因序列，再利用外切酶切割，产生sticky end 藉此可以不需要ligase就可以将载体及基因序列接在一起形成完整质体。
2.MEF细胞MEF 全称 Mouse Embryonic Fibroblast 是典型的梭状成纤维细胞。
实验室取MEF细胞一般是用13.5天的胚胎。
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