开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一．研究问题：
I型糖尿病又称胰岛素依赖型糖尿病（Insulindependent diabetes mellitus， IDDM），其标志为对胰脏beta;细胞自身抗体耐受的丧失，是由于机体自身反应性免疫应答攻击胰岛beta;细胞，使其遭破坏、功能缺失，从而导致胰岛素绝对缺乏所引起的糖尿病。容易导致胰岛损伤、血糖失控、以及严重的长期并发症。从另一方面来说IDDM是由遗传和环境因素相互作用而引起的一种代谢异常综合征。胰岛素依赖型糖尿病已成为危害青少年健康最主要的慢性病之一，其治疗仍然是全球医疗的棘手问题。
目前正在欧洲进行III期临床研究的一种名为DiaPep277的药物，是由人HSP60蛋白上437～460位的一段特异性肽段。然而，近期研究发现用P277肽按照国外DiaPep277相同的皮下给药方式进行给药，能引起血管内皮细胞损伤，并诱发肌体产生抗体而诱发严重的动脉粥样硬化。本实验室在发现P277肽经皮下注射免疫会诱发动脉粥样硬化的基础上，通过P277肽内部功能性肽段的分子解析，探明了P277肽分子内部治疗糖尿病的分子表位P2，并用更加安全的B辅助表位IA-2B表位替换P277肽中会诱发动脉粥样硬化的B表位，筛选到一种有效预防糖尿病的新型疫苗肽IA2P2，并将该重构肽段重复六次融合在HSP65载体的C端(HSP65-6IA-2-P2)，构建到pCYT和pHJ载体上，电转入L.lactisNZ9000宿主菌中，鉴定该重组蛋白的表达情况。考察其通过乳酸乳球菌递送后的免疫效果，研制出新型的抗糖尿病黏膜免疫疫苗。
二．研究手段：
2.1工程菌生长曲线测定
从含有重组蛋白表达株L.lactisNZ9000 pHJ:HSP65-6IA2P2PCTY：HSP65-6IA2P2的GM17琼脂糖平板，挑取单个菌落接种于含氯霉素（终浓度7.5mu;g/ml）的液体GM17培养基中，30℃ 恒温静置培养过夜，按1% 的接种量接种到新鲜的含氯霉素（终浓度7.5mu;g/ml）的液体GM17培养基中，转接后于30℃恒温静置培养，用紫外分光光度计在0、2、4、4.5、5、6、7、9、10h的时候测定培养液的OD600nm值，记录工程菌生长状况。采用标准操作方法绘出生长曲线并计算培养倍增时间。
2.2制备细胞总蛋白提取物
根据所使用的表达构建体，有必要研究重组蛋白在细胞浆、细胞壁或培养上清中的数量。
收获5ml乳酸菌（OD600nm＝0.4～0.6），4℃ 4000rgm离心5min；用PBS缓冲液洗菌体3次；用200mu;l含溶菌酶（5mg/ml）的PBS重悬浮菌体，混合后37℃孵育1h；1500rpm离心10min，收获裂解物；将含细胞提取物的上清移入新的微量离心管中；在蛋白上清中加等量的2SDS-PAGE样品缓冲液，煮沸5min，直接用于SDS-PAGE或免疫印迹分析。
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
