开题报告内容：新型抗肿瘤药物与基因联合共传输系统的研究
一、实验目的与意义
肿瘤是当今世界一个严重威胁人类生命安全的问题。在全世界范围内，发展中国家的问题更为严峻。中国是世界上最大的发展中国家,肿瘤问题的紧迫性更加突出。当下治疗肿瘤最主要的手段为放疗和化疗，但主要存在以下问题：疗效不佳，毒副作用大、多药耐药（multi-drug resistance，MDR）等。所以人们现在正发展新型的治疗方案，进而解决上述难题，从而实现治疗目的和减少不良反应的双重目标。实践证明，单一的治疗方案远远没有联合不同机制所采取的治疗方案效果好。最新研究表明，新型抗肿瘤药物与基因联合共传输系统，可以实现提高疗效且可显著降低毒副作用的双重目标，是一种联合多机制的新型肿瘤治疗模式。而基因治疗，基因载体的研究发展对于共传输系统的构建具有极其重要的意义。
非病毒基因载体PEI具有优良的转染效率，利用其这一特性，可制备新型的抗肿瘤药物与基因联合共传输系统，DC对肺癌、乳腺癌、脑癌等癌症都具有优良的药效，本课题主要介绍了 PEI-DC-DNA 三元复合物的制备及理化性质的研究。
1995 年，由 Boussif等人最先报道PEI可以作为非病毒基因载体，并且说明该聚合物具有良好的转染效率。目前，基因转染的参照物通常为 PEI，尤其是 25 kDa PEI 和 22 kDa PEI，在该领域被称为“黄金标准”。PEI 之所以能够具有高效的转染效率是因为：第一，有较高的电荷密度。第二，有较 好的质子缓冲能力。在正常生理条件下，因为氨基没有质子化，所以当pH降低时，PEI的氨基会逐渐质子化，进而使得内涵体以及溶酶体的膜结构被破坏，最终使得复合物易于进入细胞质中。
大量文献已报道，DC作为一种小分子药物，对多种肿瘤细胞都有杀伤作用，临床研究也已经证实，DC可显著抑制肺癌，乳腺癌等多种癌细胞的生长。除此之外，DC还有 一系列的显著优势：1.对肿瘤部位的选择性较高，而对正常组织的杀伤效果较弱，极大地增加了临床用药的安全性。2.作为一种小分子药物其成本低廉。3.可口服，安全性好。4. 易于代谢。5.DC的毒副作用发生率不高。
本课题将基于基因联合共传输系统的优良特性，并研究调查了基因治疗的特点，将药物准确输送到靶部位进行给药。该基因联合共传输系统具有如下优点：（1）改善了目前大多数药物所共有的 MDR 问题。（2）提高了药物的靶向效率，减轻毒副作用。（3）改善了药物在体内的生物利用度。（4）成本低廉。
- 拟研究或解决的问题
- 建立PEI-DC-DNA 三元复合物的制备方法。
- 对PEI-DC -DNA 复合物稳定性评价进行评价。
- 对PEI-DC-DNA 复合物的粒径、zeta 电势的测定及形态观察。
- 实验内容
3.1质粒 DNA 的大量制备
3.1.1感受态细胞的制备
(1) 大肠杆菌 DH-5alpha;，将保存的菌种冷冻，挑取一环并划线接种，然后在 LB 固体培养基平板上活化，于37℃下，培养过夜（约 16h）。
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