开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
- 拟研究的问题
NOD样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体是一种分子量约为700Kda 的大分子多蛋白复合体,是体内重要的感受器,参与对病原体的识别,并产生相应的免疫应答反应,参与机体固有免疫和获得性免疫防御体系的构建。NLRP3炎症小体活化后参与免疫性疾病、心血管疾病、神经系统疾病等多种疾病发生及发展过程。
金雀异黄素(Genistein,GEN)也称染料木素,主要存在于豆科植物中,具有显著的抗炎、抗氧化、降血脂及抑制肿瘤增殖的作用。本课题组前期设计合成了一系列金雀异黄素的衍生物,经过体外筛选,GEN-27表现出了较强的抑炎抑癌活性。
本研究拟选取人THP-1白血病细胞来源的巨噬细胞,ICR小鼠骨髓来源的巨噬细胞,分别探讨GEN-27对NLRP3炎症小体的调控作用。
- 研究手段
(1)实验材料:
THP-1来源的巨噬细胞、L929细胞、ICR小鼠(六周龄)、GEN-27等。
(2)实验方法:
1.THP-1细胞的培养。
将THP-1细胞复苏后接种于75 cm2培养瓶中培养,培养瓶中含有6 mL含10 % FBS的对应培养基,THP-1细胞悬浮生长,以2~ 4times;105个/mL接种于塑料培养瓶中,置于5% CO2, 37℃恒温及饱和湿度的培养箱中培养,当细胞数达到8times;105个/mL时,进行离心传代。
2.ICR小鼠骨髓来源巨噬细胞的培养。
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