光敏感抗体靶向纳米递药体系的制备与表征文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

一、拟研究或解决的问题

1.利用抗体的特异性免疫能力，制备含抗体EGFR的已载入光敏剂酞菁锌的载体PEG-PLA的靶向纳米递药体系。

2.对该光敏感抗体靶向纳米递药体系的表征。

二、研究手段

1.利用抗体与载体的静电作用如范德华力等的关系，设计含有特定抗体EGFR的光敏感抗体靶向纳米递药体系。

2.利用相应的靶向癌细胞对该光敏感抗体靶向纳米递药体系进行表征。

三、文献综述

1. 实验背景

癌症也被称为恶性肿瘤，它是一百多种相关疾病的统称。人体的所有器官都由细胞组成，细胞正常的生长和分化可以满足身体的需要，这种有序的过程可以保持人体的健康。但当身体内的细胞发生突变，细胞将进行不断地分裂形成大量额外的细胞，这类额外的细胞就形成了肿瘤。随分子生物学的研究发展，对于癌症的发病机理和其在产生和发展的过程中起到重要作用的特异性的酶有了更加深入的了解，使得这些特异酶作为研制抗癌药物的分子靶标成为了可能[1]。

抗体具有特异性，与相应抗原有较强的结合能力，是纳米载体中应用广泛的靶向配体之一 [2]。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是乳腺癌靶向治疗的潜在靶点之一。EGFR基因编码的表皮生长因子受体是跨膜糖蛋白,属于蛋白激酶家族成员,其配体主要为表皮生长因子家族,能够实现对癌细胞的存活和增殖的调节[3]。乳腺癌组织中EGFR的阳性表达率较乳腺纤维腺瘤组织、正常乳腺组织中明显增高,差异具有统计学意义(Plt;gt;乳腺纤维腺瘤与正常乳腺组织中EGFR的阳性表达率差异无统计学意义[4]。

聚乳酸(PLA)具有生物无毒, 生物可降解以及生物相容性的特点 ,近年来, 使用PLA 制备的纳米粒被广泛的应用于基因载体,并采用聚乙二醇(PEG)对疏水材料PLA 进行结构修饰,能够较好的改善PLA 的疏水性 ,有利于更好的装载亲水性的DNA ,且有望提高纳米粒的体内稳定性等[5]。 PEG-PLA所制备的纳米粒具有良好的缓释作用［6］。酞菁作为第二代光敏剂具有很强的可修饰性,通过改变中心金属离子和苯环上的取代基可以大大改善溶解性及其理化性质[7]。将光敏剂选择性地富集在肿瘤细胞里,然后在一定波长的光照射下,光敏剂通过产生的活性氧杀死肿瘤细胞[8]。

2. 实验计划

2.1 光敏感抗体靶向纳米递药体系的制备

称取一定量的酞菁锌溶于DMSO/DMF/THF中，利用超声将其完全溶解后，将其滴加于PEG-PLA水溶液中进行载药，将载药后的溶液置于纯水中透析，每隔一定时间进行换水，次日将透析袋中溶液进行离心，过滤，最后进行冷冻干燥。采取相应非共价键结合的物理方法，如静电吸引作用将抗体EGFR修饰于纳米载体上。

2.2光敏感抗体靶向纳米递药体系的表征

该光敏感抗体靶向纳米递药体系的表征，需准备人乳腺癌细胞MCF-7的溶解产物，细胞须在PH7.4，含有胰蛋白酶和EDTA的PBD溶液中进行处理，在经过离心并用PBD进行洗涤以及相应的方式进行后续处理。将一定量的已制备的光敏感抗体靶向纳米递药体系加于预涂膜中进行一定时间的孵化并用PBD进行洗涤，观察结果达到对该递药体系的表征的目的。采用粒度/zeta电位测定仪测定纳米粒的光散射粒径及其分布。采用HPLC法测定药液中药物浓度，根据药物浓度计算纳米递药系统的载药量及包封率，计算公式如下：

载药量%(DL)=纳米粒中药物质量/纳米粒总质量*100%；

包封率%(ER)=(Wo-W)/Wo*100%，其中W：游离药物的量；Wo：总投药量。

表征抗体的western blot实验，步骤如下：1.收集蛋白样品；2.电泳，(1)SDS-PAGE凝胶制备，(2)样品处理，(3)上样与电泳；3.转膜；4.封闭；5.一抗孵育；6.二抗孵育；7.蛋白检测；8.膜的重复利用。

四、参考文献

[1]袁继文. 以EGFR为靶点的抗肿瘤化合物的设计、合成及生物活性评价[D].南京大学,2014.

[2]Manjappa AS, Chaudhari KR, Venkataraju MP, et al. Antibody derivatization and conjugation strategies: application in preparation of stealth immunoliposome to target chemotherapeutics to tumor [J]. J Controlled Release, 2011, 150(1): 2-22.

[3]佟琳. 探讨广东汉族女性乳腺癌的EGFR信号通路主要基因及乳腺癌细胞中主要癌基因的突变情况[D].南方医科大学,2013.

[4]张景华,王保信,汪萍,张德才. 乳腺癌组织中HSG和EGFR的表达及其与临床病理特征的关系[J]. 实用癌症杂志,2013,(01):24-27.

[5]邹伟伟,张娜. 纳米粒沉淀法制备阳离子载基因PLA-PEG纳米粒[J]. 中国生化药物杂志,2009,(01):1-5.

[6]ESSA S，RABANEL J M，HILDGEN P． Characterization of rhodamine loaded PEG-g-PLA nanoparticles ( NPs) : Effect of poly ( ethylene glycol) grafting density［J］ ． Int J Pharm，2011， 411 ( 12) :178187

[7]叶发荣,胡萍,黄明东,刘见永. 水溶性阳离子型酞菁锌光敏剂的合成及其抗菌、抗肿瘤活性研究[A]. 中国化学会.中国化学会第29届学术年会摘要集第21分会：光化学[C].中国化学会:,2014:1.

[8]夏春辉. 纳米TiO_2与新型两亲性酞菁锌光动力抑制肝癌细胞的机制研究[D].吉林大学,2011.