一、立题依据
干细胞是指有克隆形成能力的未分化细胞,具有自我更新和多向分化的特点。目前,用于组织修复和再生的间充质干细胞( mesenchymal stemcells,MSC) 多采用成体多能干细胞[1]由于骨髓获取需要麻醉,会引起取材点的疼痛,对病人身体和心理造成一定的伤害; 而且MSCs体外纯化率较低,干细胞的分化能力随供体年龄增长而下降,特别不适合老年性疾病的治疗[2 - 4]。因此许多学者致力于寻找一种新的种子细胞取代MSCs。
脂肪干细胞(adipose-derived stem cells ,ADSCs)是存在于脂肪组织内血管周围间质部分,具有可粘附性及多向分化潜能的一类间充质干细胞。研究发现ADSCs细胞能够在体内稳定增值且衰亡率低,且ADSCs在适当的诱导下,可分化成骨组织、软骨组织、肌组织和脂肪组织[5]。
自从Zuk等[6]人从吸脂术抽取的脂肪组织悬液内最先分离培养出多能干细胞以来,脂肪组织日益成为人类干细胞库的重要来源,ADSCs 也日益成为再生医学领域最有前景的种子细胞。目前,在组织工程和细胞治疗研究领域,ADSCs展示出很好的临床应用前景。研究发现ADSCs 具有和骨髓间充质干细胞(BM SCs)相似的形态、生长特性、分子表型和多向分化能力。与ADSCs 相比,BM -SCs来源有限,取材过程创伤大,其广泛应用受到限制。而ADSCs 不但具有来源丰富,取材容易、损伤小,没有伦理道德的局限,而且不表达人类白细胞抗原(HLA -D R) ,从而避免了移植物抗宿主反应。另外,ADSCs 分离提取率高,研究表明1g脂肪中可以提取出约5000个ADSCs ,而1ml骨髓中只能获取100-1000个BM SCs[7] 。
脂肪干细胞是近年来组织工程种子细胞的研究热点,但文献未见报道ADSCs 特殊、高效的分离方法,本实验在既往ADSCs 分离纯化方法的基础上,对大鼠AD SCs 的分离纯化方法进行了探索和改良,以期为ADSCs 的进一步研究和应用提供方法依据。
二、本实验拟解决的问题:
体外分离以及培养大鼠脂肪干细胞( Adipose derived stem cell,ADSCs) 。
三、实验材料及方法
主要动物及材料:
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