Zeb1真核表达载体的构建与验证文献综述

 2023-02-05 09:02

研究手段:1.细胞培养(1)PBS缓冲液,DMEM完全培养基37℃预热。

取出液氮中保存的293T细胞,将细胞快速融化。

(2)从水浴锅中取出冻存管,先用纸巾擦干表面,移至超净台,再用酒精棉擦拭管壁消毒,转10mL螺纹口离心管中加入5mL已预热的PBS缓冲液,将冻存管内冰珠倒入10mL螺纹口离心管中,轻轻震荡,细胞会快速融化,1000rpm离心5min,弃上清。

(3)加入5mLPBS轻轻晃动洗漆,1000rpm离心3min,弃上清。

(4)重复步骤(3)(5)加入5mL新配置的DMEM完全培养基,轻柔吹打,使细胞重新悬浮后,转移至25细胞培养瓶中,适当补充培养基,放入培养箱中培养,温度为37℃,,注意培养基颜色变化及时更换培养基,定期观察细胞形态、生长状态及时传代。

2.细胞传代(1)DMEM完全培养基、PBS及0.25%胰酶-EDTA实验前37℃预热。

(2)从培养箱中取出细胞,培养瓶表面用酒精棉擦拭消毒,放于超净台中,吸出培养基,加入约10mL PBS,十字摇晃轻柔洗涤细胞避免机械损伤,吸出PBS,重复2次。

(3)加入2mL 0.25%胰酶-EDTA,十字摇晃,使细胞与0.25%胰酶-EDTA充分接触,静置30s充分消化细胞,使贴壁的细胞脱落,成为细胞悬液(过程快速轻柔,防止消化过度,避免机械损伤)。

将细胞悬液转移至10mL螺纹口离心管中,1000rpm离心5min,弃上清。

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