一类新药TIGIT单抗的分子大小变异体纯度研究文献综述

 2022-12-27 10:12

开题报告内容：

  1. 选题的目的和意义：

一类新药TIGIT单抗为新型抗肿瘤药物，目前正处于临床前的药学研究阶段。本课题计划开展TIGIT单抗药物的分子大小变异体纯度研究，主要包括检测方法的开发和优化，方法验证以及该单抗药物的分子大小变异体纯度的检测。该研究对于产品的质量控制和产业化开发具有重要的意义。新药TIGIT单抗如果能够研发成功，将会给广大患者带来福音。而分子大小变异体纯度研究在单抗类新药研发中至关重要，是单抗类新药研发的必经之路。

  1. 国内外的研究现状：

研究表明阻断TIGIT能增强NK和T细胞的活化及脱颗粒水平，并且也能增加细胞因子如 IFN-gamma;和 TNF-alpha; 的分泌，能够显著抑制肿瘤的发展[1]，亦有研究表明T细胞上的TIGIT在系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）的发生和发展中起着关键作用[2]。系统性红斑狼疮是一种病因不明、多发于青年女性的累及多器官自身免疫性疾病，它的特征是出现多种自身抗体、补体活化和免疫复合物沉积，导致肾脏、心脏等组织器官损伤。TIGIT是一种是新兴的NK和T细胞共有的抑制性受体， TIGIT单抗能激发了有效的抗肿瘤免疫应答，逆转机体的肿瘤免疫耐受，可用于对肿瘤的治疗，亦能恢复NK细胞的正常功能，对治疗SLE有积极作用。TIGIT是由I型跨膜蛋白（N端在胞外），免疫球蛋白可变区（IgV）样结构域、跨膜区和ITIM三部分组成[3]，胞内段的免疫受体酪氨酸抑制基序（ITIM）及 ITT样基序，胞外段的 IgV 结构域及Ⅰ型跨膜区[4]。TIGIT主要表达于的T细胞、调节性T细胞和记忆T细胞，此外NK细胞也有表达[5]与其他免疫细胞表面的受体发挥协同抑制作用[6]。目前TIGIT单抗各国都还处于研发阶段，尚未查到有关TIGIT单抗纯度研究的相关文献。但查到关于其他单抗的纯度研究的文献。纯度研究主要利用分子排阻高效液相色谱 (SEC-HPLC)、非还原毛细管电泳 (CE-SDS)单克隆抗体分子大小变异体应采用适宜的方法，如分子排阻色谱法（SEC-HPLC)、非还原型和还原型十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、十二烷基磺酸钠-毛细管凝胶电泳（CE-SDS）和分析型超速离心（AUC）等多种方法对单抗的分子大小变异体（即单体、聚合体或片段）进行适当鉴定和定量分析[7]，并结合液质联用 (LC-MS)、抗体依赖细胞介导的细胞毒活性检测 (ADCC) 等技术对单克隆抗体分子大小变异体进行研究[8]。分子大小变异体是抗体药物常见的变异体类型，也是抗体稳定性评价和研究中需重点关注的变异体类型。单抗在特定的条件下，或会形成高分子量分子如二聚体[9]、多聚体[10,11]；或发生降解、断裂形成低分子量的片段[12]。分子大小变异体会影响抗体的活性或效价，并会改变药物在体内的代谢[12,13]，或增加免疫原性[14,15]，对产品的安全性和有效性带来挑战。需要特别关注聚合体，因为许多与抗体偶联的小分子药物具有较强的疏水性，可能会增加生产和贮藏期间聚合体的形成[7]。

  1. 选题研究的内容：

完成SEC-HPLC、还原CE-SDS和非还原CE-SDS的方法开发及优化；完成SEC-HPLC、还原CE-SDS和非还原CE-SDS的方法验证；完成多个批次的TIGIT单抗中间产品，原液或成品的检测及结果分析。

  1. 选题研究的技术方案、研究方法和要解决的问题：

使用分子排阻色谱法（SEC-HPLC)、非还原型和还原型十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、十二烷基磺酸钠-毛细管凝胶电泳（CE-SDS）等多种方法对TIGIT单抗的分子大小变异体（即单体、聚合体或片段）进行适当鉴定和定量分析。可依据《中国药典2015版》3127单抗分子大小变异体测定法（CE-SDS法）及通则0514分子排阻色谱法、通则0541电泳法中聚丙烯酰胺凝胶电泳部分以及通则0542毛细管电泳法等[16]中的方法作为实验的基本方案，在此基础上根据TIGIT单抗的特性进行实验优化。尚待解决的问题：应尽快熟悉Agilent HPLC 1200、Agilent HPLC 1260、Proteinsimple Maurice、Agilent 7100和Beckman PA800 Plus等仪器的操作。

  1. 进度安排：

第1-2周（2月25日至3月10日）：收集有关资料，详细了解分析课题，查阅文献。查看毕业论文任务书并在导师的指导下完成论文开题报告；

第3-10周（3月11日至5月5日）：实验方案确立，实验准备及进行相关的实验；

第11-12周（5月6日至5月19日）：实验数据处理及分析；

第13周（5月20至5月26日）：在导师指导下撰写毕业论文；

第14周（5月27至6月2日）：上交毕业论文，答辩审核；

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