这次的课题的目的是研究碳-氮键合成酶SbnA对toxin A和OPS的反应的亲和力,如果证明SbnA可以以较高的亲和力催化toxin A和OPS合成AMA,就可以得到一个两步酶合成AMA的途径,使得AMA的合成更为高效。
Toxin A和OPS反应我们所期望生成的产物为aspergillomarasmine A(AMA)。
根据此前的研究资料显示。
SbnA存在于金黄色葡萄球菌内,其作用是参与金黄色葡萄球菌的一种铁载体SB的合成,这种载体对金黄色葡萄球菌的生长繁殖是所必需的。
SbnA具体所催化的反应是以L-谷氨酸和OPS为底物合成产物ACEGA。
而根据SbnA的反应类型,我们有理由进行假设SbnA也有可能催化toxin A和OPS进行反应生成AMA。
在研究的具体操作上,我们将首先使用购买所得的pET28a_SbnA质粒,用其转化大肠杆菌BL21,构建SbnA的大肠杆菌异源可溶性表达系统。
构建成功后,将大肠杆菌进行培养,诱导其表达产物SbnA,接下来收集产物,利用组氨酸标签/Ni-NTA亲和色谱分离技术纯化SbnA。
然后利用用紫外-可见分光光度法检验SbnA对目标底物toxin A和OPS的活力即可,其中toxin A和OPS皆通过购买所得。
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